Тезисы VIII Симпозиума ветеринарных онкологов
Москва, 20–21 сентября 2023 г., клиника «Биоконтроль»
Цитохимическое окрашивание на щелочную фосфатазу для дифференцировки остеосарком от других мезенхимальных опухолей
Екатерина Витальевна Абрамова
врач-цитолог отделения патоморфологической диагностики ВОНЦ «Биоконтроль», г. Москва
Злокачественные опухоли кости подразделяются на первичные и вторичные.
К первичным опухолям кости относятся:
- Остеосаркома
- Хондросаркома
- Фибросаркома
- Гемангиосаркома
- Липосаркома
- Мультилобулярная (многодольчатая) опухоль
- Лимфома
- Плазмоцитома/множественная миелома
- Гигантоклеточная опухоль кости
Вторичные опухоли кости:
- Метастатические (уротелиальная карцинома мочевого пузыря, аденокарцинома предстательной железы, молочной железы, рак почки, остеосаркома, рабдомиосаркома).
- Инвазия
Наиболее часто встречающейся опухолью кости у собак и кошек является остеосаркома [1,2]. Остеосаркома составляет до 85% злокачественных опухолей костей у собак и примерно 70% у кошек. Опухоль имеет агрессивное биологическое поведение (быстрый рост, инвазия в мягкие ткани и имеет высокий метастатический потенциал) [5].
Все мезенхимальные новообразования имеют схожие цитологические признаки – округлые или веретенообразные клетки с базофильной цитоплазмой, ассоциированные с малиновым матриксом, и цитологически могут быть трудно различимы [6].
С целью более точной дифференцировки остеосаркомы от других сарком цитологическим методом в литературе предлагается использование дополнительного цитохимического окрашивания на щелочную фосфатазу [3,4,5,6,7,].
Нитросиний тетразолия хлорид (NBT)/5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат-толуидиновая соль (BCIP) — субстрат для щелочной фосфатазы, который подвергается окислению/восстановлению после дефосфорилирования ферментом, что приводит к изменению цвета нерастворимого продукта в месте реакции [4].
Методика окрашивания:
- С окрашенных препаратов по Романовскому удалить масло (промыть препарат ксилолом, затем дистиллированной водой)
- Залить предметное стекло реагентом ЩФ (BCIP/NBT) комнатной температуры
- Инкубация 1 час
- Хорошо промыть водой
- Высушить и микроскопировать
Цель настоящего исследования состояла в том, чтобы оценить диагностическую полезность обнаружения экспрессии щелочной фосфатазы для дифференцировки остеосаркомы от других сарком цитологическим методом, предварительно окрашенных красителем азур-эозин по Романовскому.
Материалы и методы В исследуемую группу были включены цитологические препараты гистологически, и, при необходимости, иммуногистохимически подтверждённых опухолей у собак и кошек. Ранее окрашенный красителем азур-эозин по Романовскому цитологический материал покрывали реагентом нитросиний тетразолия хлорид/5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат-толуидиновая соль и инкубировали 1 час.
Всего было оценено 57 новообразований от различных пациентов, как кошек, так и собак: 27 остеосарком, 9 хондросарком, 1 мультилобулярная опухоль, 1 веретеноклеточная саркома кости, 3 гемангиосаркомы, 3 саркомы мягких тканей (фибросаркома), 1 рабдомиосаркома, 2 анаплазированные гигантоклеточные саркомы, 1 гистиоцитарная саркома, 2 периваскулярные саркомы, 1 гастроинтестинальная стромальная опухоль/лейомиосаркома, 2 лейомиосаркомы и 4 злокачественных беспигментных меланом.
| Тип опухоли | Локализация | Морфологический тип |
| Остеосаркома | Грудные и тазовые конечности, верхняя челюсть, скуловая кость, ребро
|
телеангиоэктатическая, хондробластическая, фибробластическая, остеобластическая
|
| Хондросаркома | Конечности, палец, челюсть, ребро, лопатка, скакательный сустав, н/о подъязычной области, носовая полость, лобные пазухи
|
|
| Другие саркомы
|
Мягкие ткани, кость, внутренние органы (мтс), селезенка, матка, поджелудочная железа, кишечник
|
|
| Злокачественная беспигментная меланома
|
Ротовая полость, слизисто-кожная кайма нижней губы, мтс меланомы в л/у
|
Полученные результаты Цитохимическое окрашивание было выполнено на всех 57 цитологических препаратах. Окрашивание считалось положительным, если все или большее количество клеток препарата имели чёрно-серую зернистость в цитоплазме. Отрицательным результат считался, если во всех клетках не наблюдалось цитоплазматической чёрной зернистости или единичные клетки препарата имели положительное окрашивание. Также встречались случаи частичного окрашивания клеток, где примерно половина клеток имело положительное окрашивание, а половина клеток — отрицательное окрашивание.
Из 57 новообразований 26 остеосарком были положительными на активность ЩФ (включая все морфологические типы остеосарком), 1 мультилобулярная опухоль, 2 амеланотические меланомы и 4 хондросаркомы также имели положительное окрашивание на ЩФ. Кроме того, 3 хондросаркомы и 1 периваскулярная опухоль имели частичное окрашивание. Остальные опухоли, в том числе первичная веретеноклеточная саркома кости, были отрицательными по ЩФ.
| Тип опухоли | Количество | Положительное окрашивание | Отрицательное окрашивание | Частичное окрашивание |
| Остеосаркома | 27 | 26 | 1 | — |
| Хондросаркома | 9 | 4 | 2 | 3 |
| Веретеноклеточная саркома кости | 1 | — | 1 | |
| Мультилобулярная опухоль | 1 | 1 | — | |
| Рабдомиосаркома | 1 | — | 1 | — |
| Гемангиосаркома | 3 | — | 3 | — |
| Саркома мягких тканей (фибросаркома) | 3 | — | 3 | — |
| Анаплазированная гигантоклеточная саркома | 2 | — | 2 | — |
| Гистиоцитарная саркома | 1 | — | 1 | — |
| Периваскулярная саркома | 2 | — | 1 | 1 |
| Гастроинтестинальная стромальная опухоль/лейомиосаркома | 1 | — | 1 | — |
| Лейомиосаркома | 2 | — | 2 | — |
| Злокачественная беспигментная меланома | 4 | 2 | 2 | — |
Обсуждение полученных результатов
Цитохимическое окрашивание на щелочную фосфатазу является дополнительным методом диагностики, который необходимо использовать в сочетании с другими методами (методы визуальной диагностики, клинические данные и цитологическое исследование). Окрашивание на ЩФ является хорошим дополнительным методом для дифференцировки костных сарком (в частности остеосаркомы) от других сарком. Также может быть дополнительным методом диагностики к гистологическому исследованию остеосарком при различных морфологических типах. Перед использованием данного метода необходимо выявление цитологических критериев злокачественности, так как неопухолевые остеобласты имеют положительное окрашивание на ЩФ.
Положительное окрашивание остеосаркомы на ЩФ (черно-серая зернистость в цитоплазме)
Отрицательное окрашивание на ЩФ (рабдомиосаркома в кости)
Список литературы:
- Si-Kwang Liu, Howard D. Dorfman and Amiya K. Patnaik. Primary and secondary bone tumours in the cat. J. small Anim. Pract. (1974) 15, 141-156.
- -K. Liu, H. D. Dorfman, A. I. Hurvitz and A. K. Patnaik. Primary and secondary bone tumours in the dog. J. small Anim. Pract. (1977) 18, 313-326.
- Julia K. Ryseff, Andrea A. Bohn. Detection of alkaline phosphatase in canine cells previously stained with Wright–Giemsa and its utility in differentiating osteosarcoma from other mesenchymal tumors. Veterinary Clinical Pathology ISSN 0275-6382. (2 статья по щф)
- Barger, R. Graca, K. Bailey, J. Messick, L.-P. De Lorimier, T. Fan, and W. Hoffmann. Use of Alkaline Phosphatase Staining to Differentiate Canine Osteosarcoma from Other Vimentin-positive Tumors. Vet Pathol 42:161–165 (2005). (1 статья по щф)
- Donald J. Meuten. Tumors in Domestic Animals. Fifth edition (2017).
- Rose E. Raskin, Denny J. Meyer. Canine andFeline Cytology. Third edition (2016)
- Rick L. Cowell, Amy C. Valenciano. Cowell and Tyler’s Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Ca